快速液相色谱纯化
使用快速色谱法进行纯化的缺点是该方法固有的分辨率较低。快速液相色谱柱使用更大的粒径和柱容量,允许使用更多的起始材料,但以分辨率和纯度为代价。如果化合物不需要更高的纯度,或者如果下一步将进行 HPLC,这可能是您的选择。
1、确定溶剂系统
样品的纯度(即混合物中有多少化合物)可以使用薄层色谱法 (TLC) 和组分的相对极性进行定性测定。使用 TLC 预先筛选佳流动相和固定相将节省时间和金钱。根据所使用的溶剂,您可能需要在通风柜中运行色谱柱,因为存在潜在的危险烟雾。
反相介质的商品种类繁多,其中具代表性的是以硅胶为载体,通过表面键合非极性分子层制备。通过控制反应时间和温度,可获得性能稳定的反相介质。在硅胶基质的反相填料中,以键合有C18、C8、C2的球形多孔填料为常见,用途广。RPC固定相大多是硅胶表面键合疏水基团,基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离。在生物大分子分离中,多采用离子强度较低的酸性水溶液,添加一定量、或等与水互溶的作为流动相。从两相的状态分类:
色谱法中,流动相可以是气体,也可以是液体,由此可分为气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。固定相既可以是固体,也可以是涂在固体上的液体,由此又可将气相色谱法和液相色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、液-液色谱。
另外,还有一种超临界流体色谱法(supercritical fluid chromatography SFC),超临界流体色谱是指用超临界流体做流通相,以固体吸附剂(如硅胶)或键合到载体(或毛细管壁)上的高聚物为固定相的色谱法。
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